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實用哺乳動物細胞培養(yǎng)手冊（中）

細胞培養(yǎng)環(huán)境1、實驗室設計細胞培養(yǎng)是一種無菌操作技術，要求工作環(huán)境和條件必須保證無微生物污染和不受其它有害因素的影響。細胞培養(yǎng)室和設計原則是防止微生物污染和有害因素影響，要求工作環(huán)境清潔、空氣清新，干燥和無煙塵。細胞培養(yǎng)室的設計原則一般是無菌操作區(qū)設在室內較少走動的內側，常規(guī)操作和封閉培養(yǎng)于一室，而洗刷消毒在另一室。2、常用設施及設備（1）超凈工作臺：也稱凈化工作臺，分為側流式、直流式和外流式三大類。（2）無菌操作間：一般由更衣間、緩沖間和操作間三部分組成。操作間放置凈化工作...

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實用哺乳動物細胞培養(yǎng)手冊（上）

細胞培養(yǎng)基本概念細胞培養(yǎng)是指從體內組織取出細胞在體外模擬體內環(huán)境下，使其生長繁殖，并維持其結構和功能的一種培養(yǎng)技術。細胞培養(yǎng)的培養(yǎng)物可以是單個細胞，也可以是細胞群。細胞培養(yǎng)目的與用途1、科學研究：藥物研究開發(fā)與基礎研究藥物研究與開發(fā)(1)新藥篩選：如化學合成藥物藥效研究、中藥有效成分篩選與鑒定等。(2)疫苗研究與開發(fā)：如病毒性疫苗的研究與開發(fā)（肝炎病毒疫苗、艾滋病疫苗等）、腫瘤疫苗(多肽疫苗)等。(3)基因工程藥物研究與開發(fā)：如干擾素研究與開發(fā)，細胞生長因子研究與開發(fā)等。(4...

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原代細胞培養(yǎng)中常遇到的誤區(qū)

原代細胞培養(yǎng)中常遇到的誤區(qū)原代細胞（primaryculturecell）是指從機體取出后立即培養(yǎng)的細胞。有人把培養(yǎng)的第1代細胞與傳10代以內的細胞統(tǒng)稱為原代細胞培養(yǎng)。原代細胞不僅廣泛應用于分子、細胞生物學和生物醫(yī)學基礎研究，如蛋白質組學、基因組學、細胞株（系）研究、DNA，RNA和遺傳學研究等，還可應用于當今熱門的生物醫(yī)藥產業(yè)如藥物篩選、藥物代謝和毒理研究、癌癥藥物的研究等。原代細胞在生物醫(yī)藥領域有不可替代性作用，市場前景廣闊。原代細胞的培養(yǎng)是指直接從機體取下細胞、組織和器...

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原代細胞鑒定技術

一、形態(tài)學鑒定1.在倒置顯微鏡中直接觀察活細胞的形態(tài)學特征2.細胞染色檢查：a)將無菌玻片置于細胞培養(yǎng)皿中，加細胞懸液后培養(yǎng)；b)待細胞長滿玻片后取出，用PBS清洗，之后放于載玻片上，待其自然干燥；c)用PBS/甲醇（1:1）固定15分鐘；d)棄固定液，加合適的染色液染色；e)染色完畢后用清水洗凈，置于空氣中干燥，f)干燥后，用二甲苯透明，光學樹脂封片后觀察。二、免疫組織細胞化學鑒定1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片；2.PBS清洗標本3...

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原代細胞傳代技術

一、貼壁細胞的消化法傳代1、吸除或倒掉瓶內舊培養(yǎng)液。2、加入1ml左右消化液（胰蛋白酶或與EDTA混合液）輕輕搖動培養(yǎng)瓶，使瓶底細胞都浸入溶液中。3、消化2-5分鐘后把培養(yǎng)瓶放置在顯微鏡下進行觀察，發(fā)現(xiàn)原貼壁的細胞逐漸趨于圓形，在還未漂起時，棄去消化液，加入培養(yǎng)液終止消化。4、用吸管將貼壁的細胞吹打成懸液，分別接種到另外兩到三個培養(yǎng)瓶中，置37℃培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。第二天觀察貼壁生長情況。二、懸浮細胞的傳代1、直接傳代①讓懸浮細胞慢慢沉淀在瓶底后，將上清吸掉1/2-2/3。②用...

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