在圖像分析體系中，Countess3細(xì)胞計數(shù)儀通常配合一次性計數(shù)板或可重復(fù)使用的流通池，結(jié)合高分辨率光學(xué)成像系統(tǒng)。檢測過程中，儀器首先將細(xì)胞懸液與熒光染料進(jìn)行混合。常用的熒光染色方案采用兩種核酸染料：一種能夠穿透完整細(xì)胞膜，進(jìn)入活細(xì)胞內(nèi)與核酸結(jié)合，發(fā)出綠色熒光；另一種則只能進(jìn)入膜受損的死細(xì)胞，與核酸結(jié)合后發(fā)出紅色熒光。儀器在特定激發(fā)光照射下，分別采集綠色與紅色兩個熒光通道的圖像，再通過圖像處理算法自動識別并計數(shù)每個通道中的熒光細(xì)胞數(shù)量?；罴?xì)胞數(shù)量由綠色熒光陽性細(xì)胞數(shù)決定，死細(xì)胞數(shù)量由紅色熒光陽性細(xì)胞數(shù)決定，細(xì)胞總數(shù)則為二者之和，細(xì)胞活率即活細(xì)胞數(shù)占總細(xì)胞數(shù)的百分比。

 

　　部分無需熒光標(biāo)記的細(xì)胞計數(shù)儀則利用明場成像結(jié)合臺盼藍(lán)染色實現(xiàn)活率檢測。臺盼藍(lán)作為一種陰離子染料，無法透過活細(xì)胞的完整細(xì)胞膜，只能進(jìn)入膜受損的死細(xì)胞并使其染成藍(lán)色。儀器通過明場圖像識別被染色的死細(xì)胞與未被染色的活細(xì)胞，計算出各自的數(shù)目。相比熒光法，臺盼藍(lán)法操作更為簡便，但抗干擾能力相對較弱，適用于細(xì)胞碎片較少、細(xì)胞狀態(tài)均一的樣本。

 

　　在流式分析體系中，細(xì)胞計數(shù)儀將細(xì)胞懸液以單細(xì)胞流的形式依次通過檢測區(qū)。每個細(xì)胞經(jīng)過激光照射點時，前向散射光強(qiáng)度反映細(xì)胞大小，側(cè)向散射光或特定熒光通道信號則反映細(xì)胞膜完整性及活性狀態(tài)。結(jié)合核酸熒光染料，流式細(xì)胞計數(shù)儀能夠同時獲取細(xì)胞總數(shù)以及活、死細(xì)胞的分類計數(shù)結(jié)果，并在短時間內(nèi)完成數(shù)萬個細(xì)胞的高通量統(tǒng)計。

 

　　現(xiàn)代細(xì)胞計數(shù)儀通常內(nèi)置自動對焦、多視野采樣與數(shù)據(jù)統(tǒng)計功能。儀器會采集多個區(qū)域的光學(xué)圖像或流式信號，排除細(xì)胞聚集體與碎片干擾，通過平均化處理降低采樣誤差，最終輸出細(xì)胞密度、細(xì)胞總數(shù)、活細(xì)胞數(shù)、死細(xì)胞數(shù)以及活率百分比等關(guān)鍵參數(shù)。這一整套光學(xué)檢測與算法識別流程，使細(xì)胞計數(shù)儀能夠在無需人工干預(yù)的條件下，快速、準(zhǔn)確地實現(xiàn)細(xì)胞活率與總數(shù)的同步測定。